Escherichia coli O157:H7 es una de las principales bacterias patógenas debido a su impacto en salud pública y aumento de resistencia a los antibióticos. Se han propuesto a las emulsiones de Aceites Esenciales (AEs) como alternativa para el tratamiento de bacterias patógenas. Por ello, el propósito de este trabajo fue caracterizar emulsiones de AEs Árbol de Té (EAT), Clavo (ECl) y Canela (EC) y evaluar su actividad contra E. coli O157:H7 in vitro. Para realizar las emulsiones, se mezcló 10 % v/v de cada aceite con 3 % de Tween 20 u 80 v/v. Posteriormente, se les sometió a ultrasonicación durante 15 min. Su caracterización se realizó por dispersión de luz dinámica y se obtuvo la concentración mínima inhibitoria (CMI) y bactericida (CMB) mediante el método de dilución en caldo. Los resultados obtenidos demostraron que la ECl con Tween 20, tuvo un tamaño de partícula, índice de polidispersidad y potencial Z estables ya que estos parámetros no cambiaron  (p>0.05) por 28 días. Por otro lado, esta misma emulsión proporcionó resultados aceptables con relación a la separación de fases (6.66 %) en comparación con lo reportado por la literatura. Finalmente, la EC con Tween 80 proporcionó las CMI (0.85 mg/mL) y CMB (0.95 mg/mL) más bajos en comparación al resto de las emulsiones. Por lo tanto, se sugiere realizar pruebas adicionales in vitro e in vivo con  EC y Tween 80.