Rickettsia rickettsii es una bacteria parasitaria intracelular obligada, causante de la fiebre manchada de las montañas rocosas (FMMR). Este patógeno sintetiza componentes esenciales para su pared celular por medio de la ruta del meso- diaminopimelato,            siendo         la      N-Succinil-L,L- diaminopimelato desuccinilasa (DapE) una de las enzimas             de esta          ruta   aún    no      explorada farmacológicamente1, la cual se ha empleado como blanco farmacológico efectivo en otros patógenos2. En el presente proyecto se investigan los posibles inhibidores de la DapE de Rickettsia rickettsii (RrDapE) con el objetivo de que potencialmente, puedan utilizarse a futuro como medicamentos con re-propósito contra la FMMR.

Se modeló la enzima RrDapE por Ab Initio a partir de su secuencia (Q9ZC93 · DAPE_RICPR). Este modelo se cargó en la plataforma ZINCPharmer, seleccionando su sitio activo como blanco para unión a fármacos. Los 500 resultados originales se revisaron manualmente, eliminando aquellos que no cumplían con los criterios de inclusión, obteniendo al final cuatro candidatos con potencial inhibidor. Se obtuvo la RrDapE de forma recombinante, clonando RrDapE en E.coli BL21_pET16b. La sobre-expresión y purificación siguió protocolos establecidos. Se realizaron ensayos de unión al equilibrio (∆IF ex290 nm- em340 nm) entre RrDapE (0.05 mg/mL) y concentraciones variables de cada fármaco. Posteriormente se realizaron estudios de inhibición utilizando p-Nitrofenil acetato como sustrato análogo (100 µM), monitoreando el decremento en la formación de p-nitrofenol (403 nm) por influencia de varias concentraciones de los fármacos.

Los cuatro candidatos con potencial inhibidor contra RrDapE fueron: Quercetina, Tigeciclina, Ertapenem y Penicilina G.

Penicilina G (Kd 29.05x10³ ± 104.50 x10³ µM; I50 429.10 ± 38.2 µM) se ha descartado como inhibidor contra RrDapE, sin embargo, tigeciclina (34.70 ± 3.02 µM; I50 0.61 ± 0.11) se propone como potencial tratamiento contra la rickettsiosis debido a sus bajos I50 y Kd. Quercetina (Kd 30.05 ± 9.05 µM; I50 17.51 ± 2.86 µM) también se propone como tratamiento alternativo o conjunto, comportándose de forma similar a lo descrito previamente para otras especies. Pese a que ertapenem presenta un I50 bajo (Kd 610.00 ± 190.0; I50 24.02 ± 4.27), su poca afinidad sugiere que no es una alternativa viable como tratamiento.